$DNA$ खंडों के पृथक्करण और विलगन की विधि समझाइए।

(N/A) रिस्ट्रिक्शन एंडोन्यूक्लिएज द्वारा $DNA$ को काटने के परिणामस्वरूप $DNA$ के टुकड़े प्राप्त होते हैं। इन टुकड़ों को < strong>जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस (gel electrophoresis) नामक तकनीक द्वारा अलग किया जा सकता है। चूंकि $DNA$ खंड ऋणात्मक रूप से आवेशित अणु होते हैं,इसलिए उन्हें एक माध्यम/मैट्रिक्स में विद्युत क्षेत्र की मदद से एनोड (anode) की ओर गति कराकर अलग किया जा सकता है।
आजकल सबसे अधिक उपयोग किया जाने वाला माध्यम एगारोज है,जो समुद्री खरपतवार (sea weeds) से निकाला गया एक प्राकृतिक बहुलक है। एगारोज जेल के छलनी प्रभाव के कारण $DNA$ खंड अपने आकार के अनुसार अलग हो जाते हैं। अतः,खंड का आकार जितना छोटा होगा,वह उतनी ही दूर तक गति करेगा। चित्र को देखें और अनुमान लगाएं कि जेल के किस सिरे पर नमूना लोड किया गया था।
पृथक किए गए $DNA$ खंडों को केवल तभी देखा जा सकता है जब $DNA$ को एथिडियम ब्रोमाइड (ethidium bromide) नामक यौगिक से अभिरंजित करके $UV$ विकिरणों के संपर्क में लाया जाए (आप शुद्ध $DNA$ खंडों को बिना अभिरंजन के दृश्य प्रकाश में नहीं देख सकते)।
एथिडियम ब्रोमाइड से अभिरंजित जेल पर $UV$ प्रकाश डालने पर $DNA$ के चमकीले नारंगी रंग के बैंड देखे जा सकते हैं (चित्र)। $DNA$ के बैंड को एगारोज जेल से काटकर बाहर निकाल लिया जाता है और जेल के टुकड़ों से अलग कर लिया जाता है। इस प्रक्रिया को क्षालन (elution) कहा जाता है। इस प्रकार शुद्ध किए गए $DNA$ खंडों का उपयोग क्लोनिंग संवाहकों के साथ जोड़कर पुनर्योजी $DNA$ (recombinant $DNA$) के निर्माण में किया जाता है।